Departamento de

Biología Celular y Genética

Bibliografía básica:

− Becker WM, Kleinsmith LJ, Hardin J (2003). Guide to microscopy. Cummings
− Cuello AC (ed) (1983, 1993). Immunocytochemistry I (vol. 3), II (vol. 14) IBRO. Wiley
− García del Moral R (1995). Laboratorio de Anatomía Patológica. Interamericana--McGraw-Hill
− Gray P (1964). Handbook of basic microtechnique. McGraw-Hill
− Harlow E, Lane D (1988). Antibodies. A laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory
− Hayat MA (2000). Principles and techniques of electron microscopy. Cambridge
− Martoja R, Martoja M (1970). Técnicas de Histología Animal. Toray Masson
− Mather JP, Barnes D (1998). Animal cell culture methods. Academic Press
− Mercer EH, Birbeck MSC (1972). Manual de microscopía electrónica para biólogos. Blume
− Morgan SJ, Darling, DC (1993). Cultivo de células animales. Acribia
− Peinado MA, Pedrosa JA, Rodrigo J (1996). Avances en inmunocitoquíca y técnicas relacionadas.
Univ. de Jaén
− Schena M (2004). Protein microarrays book. Jones and Bartlett
− Sheeler P, Bianchi DE (1993). Biología Celular. Limusa
− Viguer JM, García del Moral, R (1998). Laboratorio y atlas de citología. Interamericana Mcgraw-Hill

Bibliografía complementaria:

− Además de los textos citados, la práctica totalidad de los libros dedicados a la Biología Celular y/o
Histología poseen algunos capítulos dedicados –con mayor o menor extensión y acierto - al estudio
de las técnicas incluidas en este programa.

Temario de teoría:

TEMA 1. Microscopía óptica.

El microscopio óptico: fundamento físico y descripción de sus partes. Tipos de microscopios ópticos: campo claro, campo oscuro, contraste de fases, contraste por interferencia diferencial, polarización, fluorescencia, confocal, multifotónico, deconvolución digital, video-digital, captura láser. Procedimiento de rutina en microscopía óptica: fijación, inclusión, corte y tinción.

TEMA 2. Microscopía electrónica.

Microscopio electrónico: fundamento físico y descripción de sus partes. Tipos de microscopios electrónicos: TEM, SEM, HVTEM, microscopios analíticos, microscopios de sonda de barrido. Métodos de procesamiento del material para su estudio al microscopio electrónico: técnicas de rutina en TEM y SEM, sombreado, criofractura, criograbado, tinción negativa, microscopía crioelectrónica, microscopía estéreo-electrónica.

TEMA 3. Inmunotécnicas.

Definición. Concepto de antígeno y anticuerpo: avidez y afinidad, anticuerpos poli- y monoclonales. Herramientas y modo de procedimiento básico en inmunodetección: anticuerpos primarios, secundarios y terciarios; marcaje. Especificidad y control de la especificidad: bloqueo, especificidad, curvas dosis-respuesta, controles positivos, controles negativos. Descripción de inmunotécnicas: inmunohistoquímica, inmunocitoquímica, inmunoprecipitación, micromatrices proteicas (protein microarrays).

TEMA 4. Cultivos celulares.

Consideraciones generales. Equipamiento básico: incubador de CO2, cámara de flujo, sistemas de esterilización. Técnica aséptica. Medios de cultivo. Tipos de cultivos. Contaminación. Aislamiento de un tipo celular. Técnicas de clonación celular. Crecimiento del cultivo. Contaje celular. Sincronización.

TEMA 5. Técnicas autorradiográficas.

Radioisótopos. Autorradiografía. Espectrometría de centelleo. Experimentos de pulso y caza. Radioinmunoanálisis (RIA). Efectos biológicos de la radiación.

 

Temario de Prácticas:

1. Fijación de muestras para microscopía óptica, deshidratación e inclusión en parafina. Realización de cortes con microtomo de parafina, tinción y montaje.

2. Técnicas de inmunomarcaje en microscopía óptica. Realización de inmunomarcaje sobre secciones en parafina.

3. Fijación de muestras, deshidratación e inclusión en diferentes resinas para microscopía electrónica. Obtención de cortes semifinos y ultrafinos con ultramicrotomo, tinción de cortes semifinos y contraste de rejillas para microscopía electrónica.

4. Técnicas de inmunomarcaje en microscopía electrónica. Realización de inmunomarcaje sobre rejillas para microscopía electrónica.

5. Observación al microscopio electrónico de transmisión de rejillas con inmunomarcaje. Observación de muestras con microscopio electrónico de barrido. Manejo básico de un equipo de microdisección por láser.

Profesores responsables:

Teoría: Guillermo Bodega Magro

Práctica: Benito Fraile Laiz